Oró ejo ni awọn ensaemusi ti o hydrolyze carbon ester bonds.Awọn sobusitireti fun hydrolysis jẹ phospholipids, acetylcholine ati acetate aromatic.Awọn enzymu wọnyi pẹlu awọn oriṣi mẹta: phospholipase, acetylcholinesterase ati aromatic esterase.Arginine esterase ni majele ejo tun le ṣe hydrolyze arginine sintetiki tabi lysine, ṣugbọn o kun hydrolyzes awọn ifunmọ peptide amuaradagba ninu iseda, nitorina o jẹ ti protease.Awọn enzymu ti a jiroro nibi nikan ṣiṣẹ lori awọn sobusitireti ester ati pe ko le ṣiṣẹ lori eyikeyi asopọ peptide.Lara awọn enzymu wọnyi, awọn iṣẹ iṣe ti ibi ti acetylcholinesterase ati phospholipase jẹ pataki diẹ sii ati pe a ti ṣe iwadi ni kikun.Diẹ ninu awọn majele ejo ni iṣẹ ṣiṣe esterase aromatic ti o lagbara, eyiti o le ṣe hydrolyze p-nitrophenyl ethyl ester, a – tabi P-naphthalene acetate ati indole ethyl ester.O tun jẹ aimọ boya iṣẹ ṣiṣe yii jẹ iṣelọpọ nipasẹ enzymu ominira tabi ipa ẹgbẹ ti a mọ ti carboxylesterase, jẹ ki o jẹ pataki rẹ ti ibi.Nigbati majele ti Agkistrodon halys Japonicus ṣe idahun pẹlu p-nitrophenyl ethyl ester ati indole ethyl ester, awọn hydrolysates ti p-nitrophenol ati indole phenol ko ri;Ni ilodi si, ti awọn esters wọnyi ba fesi pẹlu awọn ẹya-ara Ejò Ejò Zhoushan majele ejo ati Bungarus multicinctus ejò, wọn yoo yara ni hydrolyzed.O mọ pe awọn oje kobra wọnyi ni iṣẹ cholinesterase ti o lagbara, eyiti o le jẹ iduro fun hydrolysis ti awọn sobusitireti ti o wa loke.Ni otitọ, Mclean et al.(1971) royin pe ọpọlọpọ awọn majele ejo ti o jẹ ti idile Cobra le ṣe hydrolyze indole ethyl ester, naphthalene ethyl ester ati butyl naphthalene ester.Oró ejò yìí ti wá láti ọ̀dọ̀: Ejò, Ọrùn ọrùn dúdú, Ògò dúdú, Ògò wúrà, Ejò Egipiti, Ejò ọba, Ejò wura, mamba dudu ati funfun mamba (D. aw still knows east rhombola rattlesnake)
Oró ejo le ṣe hydrolyze methyl indole ethyl ester, eyiti o jẹ sobusitireti fun ṣiṣe ipinnu iṣẹ cholinesterase ninu omi ara, ṣugbọn majele ejo yii ko ṣe afihan iṣẹ ṣiṣe cholinesterase.Eyi fihan pe esterase ti a ko mọ wa ni majele kobra, eyiti o yatọ si cholinesterase.Lati loye iru henensiamu yii, a nilo iṣẹ iyapa siwaju sii.
1, Phospholipase A2
(I) Akopọ
Phospholipase jẹ enzymu ti o le ṣe hydrolyze glyceryl fosifeti.Awọn oriṣi phospholipase marun wa ni iseda, eyun phospholipase A2 ati phospholipase
A., phospholipase B, phospholipase C ati phospholipase D. Oró ejo ni akọkọ ninu phospholipase A2 (PLA2), diẹ ninu awọn oje ejo ni phospholipase B, ati awọn phospholipases miiran ni o wa ninu awọn ẹran ara eranko ati kokoro arun.Aworan 3-11-4 fihan aaye iṣe ti awọn phospholipases wọnyi lori hydrolysis sobusitireti.
Lara awọn phospholipases, PLA2 ti ni iwadi diẹ sii.O le jẹ enzymu ti a ṣe iwadi julọ ninu majele ejo.Sobusitireti rẹ jẹ asopọ ester lori ipo keji ti Sn-3-glycerophosphate.Enzymu yii wa ni ibigbogbo ni majele ejo, majele oyin, majele scorpion ati awọn ẹran ara ẹranko, ati PLA2 jẹ lọpọlọpọ ninu awọn oje ejo idile mẹrin.Nitori pe enzymu yii fọ awọn sẹẹli ẹjẹ pupa ati fa hemolysis, o tun pe ni “hemolysin”.Diẹ ninu awọn eniyan tun pe PLA2 hemolytic lecithinase.
Ludeeke kọkọ rii pe majele ejo le ṣe agbejade idapọ hemolytic nipa ṣiṣe lori lecithin nipasẹ awọn enzymu.Nigbamii, Delezenne et al.jẹri pe nigba ti majele kobra ba ṣiṣẹ lori omi ara ẹṣin tabi yolk, o jẹ nkan ti hemolytic kan.O ti wa ni bayi mọ pe PLA2 le taara sise lori phospholipids ti awọn erythrocyte awo, run awọn be ti awọn erythrocyte awo ati ki o nfa taara hemolysis;O tun le ṣiṣẹ lori omi ara tabi lecithin ti a ṣafikun lati ṣe agbejade lecithin hemolytic, eyiti o ṣiṣẹ lori awọn sẹẹli ẹjẹ pupa lati ṣe agbejade hemolysis aiṣe-taara.Botilẹjẹpe PLA2 lọpọlọpọ ninu awọn idile mẹrin ti oje ejo, akoonu ti awọn enzymu ninu ọpọlọpọ awọn oje ejo jẹ iyatọ diẹ.Rattlesnake (C
Oró ejo fihan iṣẹ PLA2 alailagbara nikan.Tabili 3-11-11 ṣe afihan lafiwe ti iṣẹ ṣiṣe PLA2 ti awọn majele pataki 10 ti awọn ejo oloro ni Ilu China.
Tabili 3-11-11 Ifiwera awọn iṣẹ phospholipase VIII ti awọn oje ejo 10 ni Ilu China
Oró ejo
Itusilẹ ọra
Aliphatic acid,
Cjumol/mg)
Iṣẹ ṣiṣe hemolytic CHU50/^ g * milimita)
Oró ejo
Tu awọn acids ọra silẹ
(^raol/mg)
Iṣẹ ṣiṣe hemolytic “(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9.62
mọkanla
Micracephal ophis
ojuami marun kan odo
kalyspallas
8.68
ẹgbẹrun meji o le ẹgbẹrin
gracilis
V, acutus
7.56
* * #
Ophiophagus hannah
ojuami mẹta mẹjọ meji
ọgọfa
Bnugarus fasctatus
7,56
igba o le ọgọrin
B. multicinctus
ojuami mẹsan mẹfa
igba o le ọgọrin
Paramọlẹ ati russelli
meje ojuami odo mẹta
T, mucrosquamatus
aaye kan mẹjọ marun
Siamensis
T. stejnegeri
0.97
(2) Iyapa ati ìwẹnumọ
Awọn akoonu ti PLA2 ni ejò majele jẹ tobi, ati awọn ti o jẹ idurosinsin lati ooru, acid, alkali ati denaturant, ki o jẹ rorun lati wẹ ati ki o ya PLA2.Ọna ti o wọpọ ni lati kọkọ ṣe isọdi gel lori majele robi, lẹhinna gbe chromatography paṣipaarọ ion, ati igbesẹ ti o tẹle le tun ṣe.O yẹ ki o ṣe akiyesi pe didi-gbigbe ti PLA2 lẹhin ion-paṣipaarọ chromatography ko yẹ ki o fa akojọpọ, nitori ilana didi-gbigbẹ nigbagbogbo nmu agbara ionic pọ si ninu eto, eyiti o jẹ ifosiwewe pataki ti o nfa akojọpọ PLA2.Ni afikun si awọn ọna gbogbogbo ti o wa loke, awọn ọna wọnyi tun ti gba: ① Wells et al.② Afọwọṣe sobusitireti ti PLA2 ni a lo bi ligand fun kiromatografi ijora.Ligandi yii le sopọ mọ PLA2 ni majele ejo pẹlu Ca2+.EDTA jẹ lilo pupọ julọ bi eluent.Lẹhin ti Ca2 + ti yọkuro, isunmọ laarin PLA2 ati ligand dinku, ati pe o le yapa lati ligand.Awọn miiran lo 30% ojutu Organic tabi 6mol/L urea bi eluent.③ Kiromatogirafi hydrophobic ni a ṣe pẹlu PheiiylSephar0SeCL-4B lati yọ itọpa PLA2 kuro ninu cardiotoxin.④ Antibody PLA2 jẹ lilo bi ligand lati ṣe kiromatogirafi ijora lori PLA2.
Titi di isisiyi, nọmba nla ti majele ejo PLAZ ti di mimọ.Tu et al.(1977) ṣe atokọ PLA2 ti a sọ di mimọ lati majele ejo ṣaaju ọdun 1975. Ni awọn ọdun aipẹ, nọmba nla ti awọn nkan nipa iyapa ati isọdi mimọ ti PLA2 ni a ti royin ni gbogbo ọdun.Nibi, a dojukọ lori iyapa ati isọdọmọ ti PLA nipasẹ awọn ọjọgbọn Kannada.
Chen Yuancong et al.(1981) yapa awọn ẹya PLA2 mẹta lati majele ti Agkistrodon halys Pallas ni Zhejiang, eyiti o le pin si ekikan, didoju ati ipilẹ PLA2 ni ibamu si awọn aaye isoelectric wọn.Gẹgẹbi majele ti rẹ, didoju PLA2 jẹ majele diẹ sii, eyiti a ti damọ bi presynaptic neurotoxin Agkistrodotoxin.Alkaline PLA2 ko ni majele ti, ati ekikan PLA2 ko ni majeleje.Wu Xiangfu et al.(1984) ṣe afiwe awọn abuda ti PLA2 mẹta, pẹlu iwuwo molikula, akopọ amino acid, N-terminal, aaye isoelectric, iduroṣinṣin igbona, iṣẹ ṣiṣe enzymu, majele ati iṣẹ ṣiṣe hemolytic.Awọn abajade fihan pe wọn ni iwuwo molikula kanna ati iduroṣinṣin igbona, ṣugbọn ni awọn iyatọ nla ni awọn aaye miiran.Ni abala ti iṣẹ-ṣiṣe enzymu, iṣẹ-ṣiṣe enzyme acid jẹ ti o ga ju iṣẹ-ṣiṣe enzyme alkaline;Ipa hemolytic ti henensiamu ipilẹ lori awọn sẹẹli ẹjẹ pupa eku ni o lagbara julọ, atẹle nipasẹ henensiamu didoju, ati enzymu acid ko ni hemolyzed.Nitorinaa, a ṣe akiyesi pe ipa hemolytic ti PLAZ ni ibatan si idiyele ti moleku PLA2.Zhang Jingkang et al.(1981) ti ṣe awọn kirisita Agkistrodotoxin.Tu Guangliang et al.(1983) royin pe PLA majele kan pẹlu aaye isoelectric ti 7. 6 ti ya sọtọ ati mimọ lati majele ti Vipera rotundus lati Fujian, ati awọn ohun-ini ti ara ati ti kemikali, akopọ amino acid ati lẹsẹsẹ awọn iṣẹku amino acid 22 ni N -ebute oko won pinnu.Li Yuesheng et al.(1985) ya sọtọ ati wẹ PLA2 miiran lati majele ti Viper rotundus ni Fujian.Apapọ ti PLA2 * jẹ 13 800, aaye isoelectric jẹ 10.4, ati pe iṣẹ ṣiṣe pato jẹ 35/xnioI/miri mg. LD5 itasi iṣan ninu awọn eku.O jẹ 0.5 ± 0.12mg/kg.Enzymu yii ni awọn ipadako ẹjẹ ti o han gbangba ati awọn ipa hemolytic.Molikula PLA2 majele naa ni awọn iṣẹku 123 ti awọn iru amino acids 18.Molikula naa jẹ ọlọrọ ni cysteine (14), aspartic acid (14) ati glycine (12), ṣugbọn methionine kan nikan ni o ni, ati N-terminal rẹ jẹ iyokù serine.Ti a ṣe afiwe pẹlu PLA2 ti o ya sọtọ nipasẹ Tuguang, iwuwo molikula ati nọmba awọn iṣẹku amino acid ti awọn isoenzymes meji jọra pupọ, ati pe akopọ amino acid tun jọra pupọ, ṣugbọn nọmba aspartic acid ati awọn iṣẹku proline yatọ diẹ.Oró ejo ejò ọba Guangxi ni PLA2 ọlọrọ ninu.Shu Yuyan et al.(1989) ti ya sọtọ PLA2 lati majele, eyiti o ni iṣẹ kan pato ni awọn akoko 3.6 ti o ga ju majele atilẹba, iwuwo molikula kan ti 13000, akopọ ti awọn iṣẹku amino acid 122, aaye isoelectric ti 8.9, ati iduroṣinṣin igbona to dara.Lati akiyesi microscope elekitironi ti ipa ti ipilẹ PLA2 lori awọn sẹẹli ẹjẹ pupa, o le rii pe o ni ipa ti o han gbangba lori awọ ara ẹjẹ pupa eniyan, ṣugbọn ko ni ipa ti o han gbangba lori awọn sẹẹli ẹjẹ pupa ewurẹ.PLA2 yii ni ipa idaduro ti o han gbangba lori iyara eletiriki ti awọn sẹẹli ẹjẹ pupa ninu eniyan, ewurẹ, ehoro ati awọn ẹlẹdẹ Guinea.Chen et al.Enzymu yii le ṣe idiwọ akojọpọ platelet ti a fa nipasẹ ADP, collagen ati sodium arachidonic acid.Nigbati ifọkansi PLA2 ba jẹ 10/xg/ml~lOOjug/ml, ikojọpọ platelet jẹ idinamọ patapata.Ti a ba lo awọn platelets ti a fọ bi awọn ohun elo, PLA2 ko le ṣe idiwọ ikojọpọ ni ifọkansi ti 20Mg/ml.Aspirin jẹ oludena ti cyclooxygenase, eyiti o le ṣe idiwọ ipa ti PLA2 lori awọn platelets.PLA2 le ṣe idiwọ akojọpọ platelet nipasẹ hydrolyzing arachidonic acid lati ṣepọ thromboxane A2.Ilana ojutu ti PLA2 ti a ṣe nipasẹ Agkistrodon halys Pallas venom ni Ipinle Zhejiang ni a ṣe iwadi nipasẹ ọna dichroism ipin, fluorescence ati gbigba UV.Awọn abajade esiperimenta fihan pe ipilẹ pq akọkọ ti henensiamu yii jẹ iru si ti iru kanna ti henensiamu lati awọn eya miiran ati gbogboogbo, imudara egungun ni resistance ooru to dara, ati iyipada igbekalẹ ni agbegbe acid jẹ iyipada.Ijọpọ ti activator Ca2 + ati henensiamu ko ni ipa lori agbegbe ti awọn iṣẹku tryptophan, lakoko ti inhibitor Zn2 + ṣe idakeji.Ọna ninu eyiti iye pH ti ojutu yoo ni ipa lori iṣẹ ṣiṣe enzymu yatọ si awọn reagents loke.
Ninu ilana ti ìwẹnumọ PLA2 ti majele ejo, ohun ti o han gbangba lasan ni pe majele ejo kan ni awọn oke giga PLA2 meji tabi diẹ sii.A le ṣe alaye iṣẹlẹ yii bi atẹle: ① nitori aye ti isozymes;② Iru kan ti PLA2 ti wa ni polymerized sinu orisirisi awọn apapo PLA2 pẹlu orisirisi awọn iwuwo molikula, pupọ julọ ti o wa ni ibiti 9 000 ~ 40 000;③ Àkópọ̀ PLA2 àti àwọn ohun èlò májèlé ejò míràn ń díjú PLA2;④ Nitori asopọ amide ni PLA2 jẹ hydrolyzed, idiyele naa yipada.① Ati ② wọpọ, pẹlu awọn imukuro diẹ, gẹgẹbi PLA2 ni majele ejo CrWa/w
Awọn ipo meji wa: ① ati ②.Ipo kẹta ni a ti rii ni PLA2 ninu majele ti awọn ejo wọnyi: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, paramọlẹ Palestine, paramọlẹ iyanrin, ati ẹru rattlesnake km.
Abajade ọran ④ jẹ ki iyara ijira ti PLA2 yipada lakoko electrophoresis, ṣugbọn akopọ amino acid ko yipada.Awọn peptides le fọ nipasẹ hydrolysis, ṣugbọn ni gbogbogbo wọn tun ti so pọ nipasẹ awọn iwe ifowopamosi disulfide.Oró ti ejo ila-oorun ọfin ni awọn fọọmu PLA2 meji, ti a npe ni iru a ati tẹ p PLA2 lẹsẹsẹ.Iyatọ laarin awọn iru meji ti PLA2 jẹ amino acid kan, iyẹn ni, glutamine ninu moleku PLA2 kan rọpo nipasẹ glutamic acid ninu moleku PLA2 miiran.Botilẹjẹpe idi gangan fun iyatọ yii ko han, o gbagbọ ni gbogbogbo pe o ni ibatan si deamination ti PLA2.Ti PLA2 ninu majele paramọlẹ ti Palestine jẹ ki o gbona pẹlu majele robi, awọn ẹgbẹ ipari ninu awọn ohun elo enzymu rẹ yoo di diẹ sii ju iṣaaju lọ.Lati C PLA2 ti o ya sọtọ lati majele ejo ni o ni oriṣiriṣi N-terminal meji, ati pe iwuwo molikula rẹ jẹ 30000. Iṣẹlẹ yii le jẹ ṣẹlẹ nipasẹ dimer asymmetric ti PLA2, eyiti o jọra si dimer asymmetric ti a ṣẹda nipasẹ PLA2 ni majele ti ila-oorun diamondback rattlesnake. ati oorun diamondback rattlesnake.Ejò Eṣia ni ọpọlọpọ awọn ẹya-ara, diẹ ninu eyiti ko ṣe pataki ni isọdi.Fun apẹẹrẹ, ohun ti a ti n pe ni Cobra Outer Caspian awọn ẹka-ẹya ni a mọ ni bayi
O yẹ ki o sọ si Okun Caspian Cobra Lode.Bi ọpọlọpọ awọn ẹya-ara ti wa ati pe wọn ti dapọ pọ, akopọ ti majele ejo yatọ gidigidi nitori awọn orisun oriṣiriṣi, ati pe akoonu ti PLA2 isozymes tun ga.Fun apẹẹrẹ, majele Ejò
O kere ju 9 iru PLA2 isozymes ti r ^ ll eya ni a ri ninu, ati pe 7 iru PLA2 isozymes ni a rii ninu majele ti awọn ẹya-ara ti cobra Caspian.Durkin et al.(1981) ṣe iwadi akoonu PLA2 ati nọmba awọn isozymes ti o wa ninu oriṣiriṣi awọn majele ejo, pẹlu 18 majele cobra, 3 mamba venoms, 5 viper venoms, 16 rattlesnake venoms ati 3 oró ejo okun.Ni gbogbogbo, iṣẹ PLA2 ti majele cobra ga, pẹlu ọpọlọpọ awọn isozymes.Iṣẹ PLA2 ati isozymes ti majele viper jẹ alabọde.Iṣẹ ṣiṣe PLA2 ti mamba maje majele ati majele ejo kere pupọ tabi ko si iṣẹ PLA2.Iṣẹ ṣiṣe PLA2 ti majele ejo okun tun jẹ kekere.
Ni awọn ọdun aipẹ, ko tii royin pe PLA2 ninu majele ejo wa ni irisi dimer ti nṣiṣe lọwọ, gẹgẹbi oorun rhombophora rattlesnake (C. venom venom ni iru a ati iru PLA2, mejeeji ti o ni awọn ipin meji kannaa. , ati ki o nikan dimerase ni o ni
Iṣẹ-ṣiṣe.Shen et al.tun dabaa pe nikan dimer ti PLA2 ti majele ejo ni fọọmu ti nṣiṣe lọwọ ti henensiamu.Iwadi ti igbekalẹ aye tun jẹri pe PLA2 ti oorun diamondback rattlesnake wa ni irisi dimer.Piscivorous agbo
PLA ^ Ei ati E2 oriṣiriṣi meji lo wa ti majele ejo, ninu eyiti 仏 wa ni irisi dimer, dimer nṣiṣẹ, ati pe monomer ti o yapa ko ṣiṣẹ.Lu Yinghua et al.(1980) ṣe iwadi siwaju sii awọn ohun-ini ti ara ati kemikali ati awọn kainetics ifura ti E. Jayanthi et al.(1989) ya sọtọ PLA2 ipilẹ kan (VRVPL-V) lati majele paramọlẹ.Iwọn molikula ti monomer PLA2 jẹ 10000, eyiti o ni apaniyan, anticoagulant ati awọn ipa edema.Enzymu le ṣe polymerize awọn polima pẹlu oriṣiriṣi awọn iwuwo molikula labẹ ipo PH 4.8, ati iwọn ti polymerization ati iwuwo molikula ti awọn polima pọ si pẹlu ilosoke iwọn otutu.Iwọn molikula ti polima ti ipilẹṣẹ ni 96 ° C jẹ 53 100, ati pe iṣẹ PLA2 ti polima yii pọ si nipasẹ meji.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu kọkanla-18-2022